Cédric ORELLE, directeur de recherche au sein de l'équipe ATP/GTPases bactériennes : résistance aux antibiotiques et nouvelles enzymes, Molecular Microbiology and Structural Biochemistry (MMSB) UMR 5086 CNRS, Université de Lyon

Je suis titulaire d’un Doctorat en Biochimie et chercheur au CNRS depuis 2015. Je m’intéresse aux mécanismes de résistance aux antibiotiques et peptides antimicrobiens chez les bactéries. J’étudie en particulier le mécanisme moléculaire des transporteurs de la famille ABC qui utilisent l’énergie d’hydrolyse de l’ATP pour conférer une résistance, souvent par un mécanisme d’efflux. Pour cela j’utilise des approches biochimiques (par exemple mutagénèse dirigée, purification et reconstitution de protéines membranaires en liposomes ou nanodisques, mesures d’activités enzymatiques, échange deuterium/hydrogene couplé à la spectrométrie de masse), biophysiques (fluorescence, RPE) et structurales (cryoEM, RMN).

Nous avons utilisé l’équipement RPE de la plateforme du laboratoire BIP (Bioénergétique et Ingénierie des Protéines, à Marseille) pour étudier les changements de conformation d’un transporteur ABC de multiples drogues appelé BmrA (Paneau A), afin de mieux comprendre son mécanisme de transport. Pour cela, nous avons combiné l’utilisation de sondes paramagnétiques de type nitroxyde et la mesure des distances entre sondes via l’approche de RPE impulsionnelle appelé DEER (Double Electron-Electron Resonance).

Grace aux expériences DEER, nous avons pu détecter des changements de distances en différentes positions de BmrA au cours de son cycle catalytique (panneaux B et C). Cela nous a permis de compléter une étude biochimique et structurale sur le degré de séparation des domaines de fixation aux nucléotides au cours du cycle de transport de BmrA. Un article est en cours de soumission à ce sujet.

Plateforme utilisée : BIP, CNRS/Aix-Marseille Université